目的:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）结合网络药理学探究黄芪桂枝五物汤治疗多发性硬化（MS）的药效物质和作用机制。方法:运用UPLC-Q-TOF-MS技术结合UNIFI软件对黄芪桂枝五物汤成分进行鉴定分析，在TCMSP数据库中获取黄芪桂枝五物汤的潜在靶点；采用STRING数据库构建蛋白相互作用（PPI）网络，分析PPI网络并挖掘内在Module；通过Metascape数据库富集分析主要参与的生物过程及通路；使用AutoDock软件进行分子对接验证，并运用PyMOL软件对数据进行可视化分析。结果:黄芪桂枝五物汤分析鉴定出41种化学成分，治疗MS核心成分有苯甲酰芍药苷、苯甲酰芍药内酯苷、芍药内酯苷、毛蕊异黄酮、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅱ等，核心靶点有分裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、分裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1（PIK3R1）、神经母细胞瘤鼠肉瘤同系物（NRAS）、V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物（HRAS）、磷酸肌醇-3-激酶α（PIK3CA）等；富集分析显示，黄芪桂枝五物汤治疗MS的生物学通路包括磷脂酰肌醇3-激酶PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路等；分子对接验证显示靶点与成分结合活性较好。结论:初步揭示黄芪桂枝五物汤多成分、多靶点、多通路的调治MS的机理，为黄芪桂枝五物汤临床治疗提供理论依据。