摘要： 目的:研究乳复方（RFF）对乳腺癌细胞MDA-MB-231铁死亡的影响机制。方法:利用网络药理学获取乳复方干预乳腺癌铁死亡靶点并分析其在乳腺癌患者中的表达。构建乳复方干预靶点的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，并对乳复方干预靶点进行富集分析，聚焦其诱导铁死亡潜在通路机制。分子对接技术评估乳复方药物有效成分与通路靶点蛋白质的结合能力。采用CCK-8法、EdU法、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞活性和细胞增殖、迁移、侵袭情况；采用亚铁嗪比色法、丙二醛（MDA）检测试剂盒、还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒和BODIPY 581/591 C1荧光探针检测评价乳腺癌细胞内氧化应激水平；使用RT-qPCR及Western blot检测验证乳复方对诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞铁死亡关键基因GPX4、xCT及通路关键基因Nrf2的mRNA及蛋白表达的影响。结果:利用生物信息学方法筛选出16个乳复方干预铁死亡靶点，网络药理学分析和分子对接结果发现乳复方作用于乳腺癌的机制与诱导乳腺癌发生铁死亡密切相关。体外实验结果表明，乳复方呈剂量依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭，导致MDA-MB-231细胞内Fe2+水平显著增加、MDA水平增加、GSH水平减少、ROS水平显著增加，诱导乳腺癌细胞铁死亡。RT-qPCR及Western blot检测结果表明，乳复方能下调铁死亡相关基因GPX4和xCT及Nrf2的mRNA和蛋白的表达水平。结论:乳复方通过Nrf2/xCT/GPX4通路，抑制Nrf2、GPX4和xCT的表达，诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞铁死亡，为中医药防治乳腺癌提供了体外实验依据。?

关键词: 乳腺癌;乳复方;铁死亡;网络药理学;体外实验;